MC3T3-E1细胞冻存的注意事项
MC3T3-E1是一种可以生长和分化成成骨细胞的小鼠胚胎成纤维细胞株，是生物学和医学研究中广泛使用的模型细胞系之一。由于其低通量，细胞库的储存十分必要。然而，细胞冻存也有其特别的注意事项和步骤，下面将介绍MC3T3-E1细胞冻存的注意事项。
细胞培养情况
在进行冻存前，细胞的培养是非常关键的。在培养细胞时，需要注意以下几点：
- 1.细胞必须处于生长期，且保存了较好的各向异性。如果你要使用低密度培养碗，你需要用新鲜的培养液为细胞补充营养物质。
- 2.注意细胞的培养时间。一周是细胞最好的培养时间，过长的培养时间可能会导致细胞不稳定，细胞的一些信号通路被抑制。
- 3.使用具有良好稳定性的地面来进行培养。培养过程中的震动和扰乱可能会引起细胞受损，从而影响细胞的生长和分化。
细胞冻存步骤
冻存细胞以后，使用很方便，但是冻存的步骤必须正确地执行，否则会影响未来细胞的生长情况。
- 1. 使用超过80%的冷却速率，将细胞从培养碗内收集。使用特殊试剂(PBS)来洗涤细胞，去除培养物质。
- 2.将细胞重悬于恰当的冷冻缓冲液中，以使细胞存活率最大化。
- 3.将细胞转移到液氮存储罐中，并以恰当的速率将温度降至-80°C。慢速冻结是细胞冻存过程中的重要步骤。
- 4.相比于-80°C，-196°C可能更适合长时间的细胞冻存。氮罐是存储细胞的理想设备，但是必须谨慎使用，避免细胞被污染。
细胞解冻前后的操作
在使用已冻存的细胞之前，需要将其解冻，下面是一些注意事项：
- 1. 在溶解过程中尽可能快地进行操作，以减少细胞被破坏的可能性。
- 2.使用适当的培养液或缓冲液对细胞进行缓冲，使细胞适应外部环境。
- 3. 温和的离心将细胞从液氮罐中取出，避免细胞在过程中受到太多的压力或震动。
- 4. 必须重视细胞分裂、粘附、生长和营养补给的变化，以便保证细胞在解冻后正常地生长和分化。
解冻的过程对细胞的生长情况会有一定的影响，解冻前尽量提前做好细胞的复苏计划是非常重要的。
